人类骨髓干细胞的靶向和保留
这些腔内充满了心脏组织并且被紧紧密封。使用蠕动泵(Flowrox,美国马里兰州林西科姆)将溶液输送到腔室。这些室通过柔性 Tygon 软管与环境培养箱相连。这确保了肌节和骨髓细胞维持在37°C、pH 7.3、120/80 mmHg。和 330 mOsm。以Gd或FITC修饰的抗体标记心脏肌节α-辅肌动蛋白作为内标,以荧光超顺磁性抗体或荧光抗体标记细胞。骨髓干细胞被连续注射。在不同的时间间隔内,停止流动,并根据荧光或松弛比率的变化来量化保留的干细胞数量。
骨髓干细胞完成向心脏组织的募集后,流过腔内的溶液为血管细胞基础培养基(ATCC,美国弗吉尼亚州阿灵顿),其中补充有重组人血管内皮生长因子 50 ng/ml、重组人表皮生长因子 5 ng/ml、重组人碱 约旦手机号码数据 性成纤维细胞生长因子 5 ng/ml、重组人胰岛素样生长因子 15 ng/ml、血管生成素-1 20 ng/ml、L-谷氨酰胺 10 mM、硫酸肝素 0.75 U/ml、氢化可的松半琥珀酸酯 1 μg/ml、抗坏血酸 50 μg/ml。在不同时间点,通过监测特定基因的表达来确认内皮分化:TJP1代表闭塞区;OCLN5代表内皮闭合蛋白;CLDN5代表内皮紧密连接蛋白; PECAM1代表血小板/内皮细胞粘附分子 1;CTNNB代表连环蛋白钙粘蛋白相关蛋白; CDH5代表血管内皮钙粘蛋白 5 。